ćwiczenia w wodzie bydgoszcz

MAPK ERK1 / 2 jest ważnym regulatorem mechanicznie indukowanej ekspresji genu i został powiązany z aktywacją NF-kB (27). Analiza fosforylacji MAPK po chemicznej (PMA) lub mechanicznej stymulacji nie wykazała różnic między Lmna a /. i komórki WT (dane nie pokazane), co wskazuje, że obserwowane zmiany są spowodowane przez zmiany w transdukcji sygnału inne niż zaburzona cytoplazmatyczna aktywacja MAPK. W komórkach spoczynkowych NF-kB jest zamaskowany w cytoplazmie przez inhibitor I (3B. Po stymulacji I (3B ulega ubichinacji i degradacji, umożliwiając translokację NF-kB do jądra i aktywację docelowych genów. Figura 5a pokazuje, że wywołana przez cytokinę degradacja cytoplazmatyczna I (3B. i translokacja podjednostki NF-kB p65 / RelA do jądra nie została osłabiona w Lmna A /. komórki. To odkrycie zostało potwierdzone w immunofluorescencji skierowanej przeciwko p65 / RelA (dane nie przedstawione). Całkowite poziomy podjednostek NF-kB p50, p65 i p105 w ekstraktach z całych komórek z Lmna A /. komórki były nie do odróżnienia od komórek WT (dane nie pokazane). Co interesujące, wiązanie jądrowej NF-kB z miejscem wiązania czynnika transkrypcji było zwiększone w komórkach z niedoborem laminatu A / Cp w porównaniu z komórkami WT (Figura 5b). Niespodziewanie, pomimo zwiększonego poziomu wiązania czynnika transkrypcyjnego, indukowana IL-1 (3 aktywność lucyferazy zależnej od NF-kB2 była znacznie upośledzona w Lmna A / P. fibroblasty (Figura 5c). Wyniki te wskazują, że niedobór odpowiedzi Lmna. /. komórki do stymulacji mechanicznej lub cytokiny są oparte na roli dla laminatu A / C w aktywacji transkrypcyjnej po związaniu czynnika transkrypcyjnego. Figura 5Przedawna sygnalizacja NF-kB w komórkach z niedoborem A / C3. (a) Analiza Western błot frakcji białka jądrowego i cytoplazmatycznego. Indukowana przez cytokinę translokacja jądra p65 / RelA i degradacja cytoplazmatycznego I. B. było nie do odróżnienia między WT i Lmna. /. fibroblasty. Białka cytoplazmatyczne obciążano w niższym stężeniu. Con, kontrola. (b) Test przesunięcia ruchliwości elektroforetycznej dla docelowej sekwencji NF-kB z użyciem białka z tych samych frakcji jądrowych, co w a. Specyficzność sondy została potwierdzona przy użyciu nieznakowanych konkurencyjnych i niekonkurencyjnych sond. Identyczność podjednostek NF-pB p50 i p65 potwierdzono testem supershift. (c) Aktywowana lucyferaza regulowana indukowana przez cytokiny NF-pB2 była znacznie upośledzona w Lmna A / b. komórki (procent linii podstawowej: 282%> 18,5% w porównaniu z 185% . 22,2%, P <0,001, n = 9). Aktywność wyjściowa nie różniła się znacząco między WT a Lmna. /. komórki. Omówienie Nasze wyniki potwierdzają znaczenie laminatu A / C dla stabilności jądrowej i podkreślają jego rolę w regulacji transkrypcji w odpowiedzi na mechaniczną lub chemiczną stymulację. Pomiary mechaniki jądrowej uzyskano za pomocą nowej techniki pomiaru odkształceń jądrowych za pomocą odkształcenia dwuosiowego przyłożonego do komórek. Ta metoda daje ilościowe pomiary sztywności jądrowej w porównaniu ze sztywnością cytoszkieletu w żywych komórkach bez konieczności izolowania jąder. Nasze wyniki dla odkształceń jądrowych w naprężonej Lmna. /. komórki doskonale zgadzają się z pomiarami uzyskanymi przez Caille et al. (25) w komórkach śródbłonka pod jednoosiowym szczepem i izolowanych jądrach komórek śródbłonka (28). Zwiększona kruchość jądra w Lmna. /. komórki dodatkowo potwierdzono eksperymentami z mikroiniekcją jądrową, które wykazały zwiększone pęknięcie jądrowe przy niskim i umiarkowanym ciśnieniu w porównaniu z komórkami WT. Znacznie zwiększona odkształcalność i kruchość jądra w Lmna. /. Komórki w porównaniu z komórkami WT mają ważne implikacje dla odpowiedzi komórkowej na odkształcenie mechaniczne. Upośledzona stabilność jądra może prowadzić do pęknięcia jądra, co bezpośrednio prowadzi do śmierci komórki. Dowody na fragmentację jąder odnotowano we włóknach mięśni szkieletowych od pacjentów z dystrofią mięśniową Emery-Dreifuss z niedoborem emerinów oraz w fibroblastach z rodzinnej częściowej lipodystrofii typu Dunnigan po leczeniu szokiem termicznym (19, 29) [podobne: napięciowy ból głowy, olx wolbrom, niewydolność nerek objawy ]