Warto zauważyć, że chociaż potencjalna strefa niedokrwienia była podobna w obu grupach MI (EPO: 32,1%> 3,9%, n = 5, sól fizjologiczna: 31,1%> 4,0%, n = 5), procent tkanki zawałowej w tym obszarze zagrożonym był znacznie zmniejszone w grupie EPO (13,8%. 4,7%) w porównaniu z grupą soli fizjologicznej (35,1%. 4,3%, P = 0,004) (Figura 5a). Reprezentatywne zabarwienie obszaru ryzyka i wielkości zawału można zobaczyć na Figurach 5, b i c, dla serc MI leczonych solą fizjologiczną i EPO, odpowiednio, wykazując znacznie mniejszy zawał (niewybarwioną tkankę) po traktowaniu EPO. Figura 5 Obszar 5LV poddany ocenie ilościowej ryzyka po niedokrwieniu / reperfuzji. (a) Graficzna reprezentacja wielkości zawału LV mierzona jako procent zawału w całym zagrożonym niedokrwieniem obszarze w królikach z MI + solą fizjologiczną (kontrola) królików (czarny pasek, n = 5) i MI + EPO (biała kreska, n = 5 ). Obszar ryzyka LV był praktycznie identyczny w obu grupach (patrz Wyniki). Dane są średnie. SEM. * P <0,005 względem MI + roztwór soli. (b) Reprezentatywne przekroje poprzeczne LV z MI + soli fizjologicznej (kontrola) królika i (c) z królika MI + EPO. Obszary zabarwione na ciemnoniebieskim zabarwieniu są tkankami niedokrwionymi, a obszary zabarwione na czerwono stanowią zagrożony niedokrwiony obszar LV. Obszary zawałowe są oznaczone jako blanszowane (żółto-białe) obszary w obrębie tego obszaru narażone na ryzyko, z dużo mniej widocznymi w sercu MI + EPO (c). TUNEL. Ponieważ króliki leczone EPO mają mniejsze zawały, jako odsetek zagrożonego niedokrwieniem lewej komory, a tym samym bardziej żywotnego miokardium. rozliczanie ulepszonej funkcji po MI. bezpośrednio ocenialiśmy, czy EPO chroni niedokrwienne miokardium przed apoptozą. W szczególności, przeprowadziliśmy oznaczanie TUNEL odcinków LV 6 godzin po MI u królików, które 24 godziny wcześniej traktowano EPO lub solą fizjologiczną. Sześć godzin po okluzji LCx stwierdzono komórki TUNEL-dodatnie u królików leczonych solą fizjologiczną i EPO, chociaż istotnie mniej zabarwienia odnotowano w grupie EPO (13,8%> 2,0% w porównaniu z 29,3%. 3,3%, P <0,001). (Figura 6a). Nie obserwowano komórek TUNEL-dodatnich u zwierząt pozorowanych (bez MI, bez EPO). Reprezentatywne sekcje barwione TUNEL pokazano na Figurze 6, b i c, wykazując mniej apoptotycznych komórek dodatnich w traktowanym EPO króliczym sercu MI (Figura 6c), co jest zgodne z niższą apoptozą w mioblastach sercowych in vitro po stresie oksydacyjnym i niedotlenieniu. Figura 6 Barwienie metodą TUNEL i oznaczanie ilościowe apoptozy in vivo w sercach królików po niedokrwieniu. (a) Graficzna reprezentacja jąder TUNEL-dodatnich w królikach sercowych MI + soli fizjologicznej (kontrola) królików (czarne słupki, n = 4) i MI + EPO (biała kreska, n = 4). Przedstawione dane są średnie. SEM liczby komórek TUNEL-dodatnich (jąder) na każde pole o dużej mocy analizowane za pomocą mikroskopu. * P <0,05 versus MI + sól fizjologiczna (kontrola) królików. (b) Reprezentatywną sekcję LV barwioną przez TUNEL z królika MI (kontrola) z królika zawierającego kilka wybarwionych dodatnio jąder apoptotycznych. (c) Reprezentatywną sekcję LV barwioną przez TUNEL od królika MI + EPO z bardzo niewielką liczbą jąder apoptotycznych. Akt AK w warunkach in vivo i aktywacja ERK indukowana przez EPO. Ponieważ wykazano, że szlak PI3K / Akt, jak również szlak ERK, jest aktywowany przez EPO w komórkach H9c2 i zaangażowany w ochronę przed uszkodzeniem hipoksycznym i być może mitogenezą, zbadaliśmy, czy te krytyczne kaskady kinaz mogą być aktywowane przez EPO u nienaruszonego dorosłego królika. serce. Normalne króliki były leczone solą fizjologiczną (kontrole) lub EPO (1000 U / kg) i uśmiercane 12 godzin później. Fosforylowane (tj. Aktywowane) Akt i ERK mierzono następnie w lizatach wytworzonych z kontrolnych i potraktowanych EPO serc królowych za pomocą immunoblottingu białka, jak przeprowadzono powyżej w komórkach H9c2 (Figura 7). Jak pokazano na Fig. 7, stwierdzono, że zarówno Akt jak i ERK są znacząco aktywowane in vivo w króliczym LV po podaniu EPO [więcej w: objaw lasegue, nefropatia cukrzycowa, migotanie przedsionków leczenie ]
