Aneksyna II i krwawienie z ostrą białaczką promielocytową ad

Skorelowaliśmy aktywność plazmin z ekspresją zarówno białka aneksyny II, jak i informacyjnego RNA (mRNA). Kwas all-trans-retinowy odwrócił nadmierną aktywność fibrynolityczną za pośrednictwem aneksyny II białkowych promielocytów blokując transkrypcję genu aneksyny II w komórkach pozytywnych pod względem translokacji. Ten efekt leku może wyjaśniać odwrócenie tendencji do krwawień w APL w pierwszych dniach leczenia kwasem all-trans-retinowym. Metody
Izolacja komórek białaczkowych
Nadmiar leukocytów krwi obwodowej lub próbek szpiku kostnego od 14 pacjentów z białaczką leczono heparyną, kodowano w celu zachowania anonimowości pacjentów i odwirowywano Ficoll-Hypaąue (Sigma, St. Louis) przy 800 xg przez 30 minut. Komórki zebrano na granicy faz między solą fizjologiczną Ficoll-Hypaque i buforem HEPES, przemyto w pożywce RPMI 1640 i ponownie zawieszono w pożywce wzrostowej.
Hodowlę komórkową
Komórki NB4, stabilną, pozytywną pod względem translokacji linię komórkową hodowano jak opisano w innym miejscu36; komórki zostały dostarczone przez dr M. Lanotte (Hôpital St. Louis, Paryż). Ludzkie komórki śródbłonka żyły pępowinowej były propagowane jak opisano gdzie indziej.37 Komórki od pacjenta z ostrą białaczką mieloblastyczną (AML) charakteryzujące się słabo zróżnicowanymi mieloblastami (AML-M1) zostały dostarczone przez dr S. Rafii (Weill Medical College of Cornell University, Nowy Jork). Okazało się, że komórki APL-1, klonowane od pacjenta z APL, były t (15; 17) -negatywne przez fluorescencyjną hybrydyzację in situ (przeprowadzoną przez Dr. MJ Macera, Long Island College Hospital, Brooklyn, Nowy Jork) i odwrotnie. -transpokaza-analiza reakcji łańcuchowej polimerazy (przeprowadzona przez Dr. E. Dmitrovsky, Memorial Sloan-Kettering Cancer Center, New York) .38 Komórki HL-60 pochodzące od pacjenta z AML dostarczył dr P. Tempst (Memorial). Sloan-Kettering Cancer Center) .39,40 Wszystkie komórki białaczkowe namnażano w pożywce RPMI 1640 zawierającej 10% surowicy płodowej cielęcej, 2 mM glutaminy, penicyliny (100 U na mililitr), streptomycyny (100 ug na mililitr) i amfoterycyny B (0,25 .g na mililitr).
Cytometrii przepływowej
Przemyte komórki od 13 pacjentów inkubowano z króliczą preimmunizowaną lub anty-aneksyną II IgG35 (100 ug na mililitr) przez 15 minut w 4 ° C, przemywano trzykrotnie, inkubowano ze skoniugowanym z izotiocyjanianem kozich anty-IgG kozich przeciwciał IgG (20 ug na mililitr) dla 30 minut w 4 ° C, utrwalono 2% paraformaldehydem przez 2 minuty w 21 ° C i analizowano na cytometrze przepływowym Epics (Coulter, Miami). Przy użyciu lizatów z ludzkich komórek śródbłonka żyły pępowinowej i komórek NB4, królicze anty-aneksyna II IgG i mysie monoklonalne przeciwciało IgG swoiste dla aneksyny II reagowały z tym samym pojedynczym prążkiem w analizie Western blot.
Pośrednia mikroskopia immunofluorescencyjna
Komórki odwirowano na szkiełkach cytospiny (134 x g) przez 6 minut w 21 ° C, wysuszono na powietrzu i utrwalono 3,7% formaldehydem przez 20 minut w 21 ° C. Preparaty przemywano, blokowano 0,1% albuminy surowicy bydlęcej i 1% normalnej surowicy koziej w soli fizjologicznej buforowanej fosforanem Dulbecco przez 20 minut w temperaturze 21 ° C, płukano ponownie, inkubowano z poliklonalną IgG przeciwko aneksynie II lub kontrolą IgG królika przed immunizacją (12). do 24 .g na mililitr) przez godzinę w 21 ° C i inkubowano ze skoniugowanym z izotiocyjanianem kozich anty-glikozylowanym fluoresceiną (8 .g na mililitr) przez godzinę w 21 ° C
[przypisy: Leukocyturia, bimatoprost, Choroba Perthesa ]
[przypisy: olx wolbrom, dermatolog gorzow, boski chillout cda ]