Jeden pacjent z nawrotem AML (pacjent 13) miał stosunkowo wysoki poziom aneksyny II (średnia intensywność fluorescencji, 5,9). Miała także podwyższone stężenie d-dimerów w osoczu, wydłużony czas protrombinowy, ciężką małopłytkowość i nadmierne krwawienie. Ekspresję aneksyny II w linii komórkowej APL o dodatniej ekspresji t (15; 17) oceniano dalej metodą blottingu Wester a eluatów z powierzchni komórek. 46 Z użyciem przeciwciała monoklonalnego IgG swoistego dla aneksyny II wykryto aneksynę II w eluatach z komórki śródbłonka żyły pępowinowej i komórki NB4 z dodatnimi komórkami t (15; 17), ale nie w eluatach z linii komórek nieujących (15, 17) (HL-60, AML-M1 i APL-1) (dane nie przedstawione) .
Generowanie Plazmin w komórkach APL
Tabela 2. Tabela 2. Aktywacja plazminogenu w obecności komórek białaczkowych. Przy użyciu testu fluorogennego ocenialiśmy zdolność komórek NB4 z dodatnim wiązaniem t (15; 17) do aktywacji plazminogenu (tabela 2). Sam w sobie, t-PA był słabym aktywatorem plazminogenu, ale z t-PA w obecności komórek NB4, szybkość generowania plazmin była zwiększona o współczynnik 28. Około 45 procent tego przyrostu nastąpiło w przypadku braku t-PA. PA, natomiast około 55 procent było zależne od egzogennego t-PA (P <0,001). Bez dodatku t-PA aktywacja plazminogenu była hamowana przez amiloryd specyficzny dla u-PA i przez przeciwciała anty-u-PA, ale nie przez przeciwciała anty-t-PA. Te wyniki sugerują, że endogenne wytwarzanie plazmin przez komórki NB4 jest w dużej mierze spowodowane przez u-PA i że komórki NB4 zwiększają aktywację plazminogenu przez mechanizmy zależne od t-PA i przez mechanizmy, które są niezależne od t-PA.
Komórki NB4 stymulowały bardziej efektywną zależną od t-PA aktywację plazminogenu niż równoważne liczby komórek ujemnych (15, 17) (Tabela 2). W przypadku komórek HL-60, AML-M1 i APL-1 wskaźniki aktywacji wynosiły odpowiednio 58,8, 48,2 i 45,2 procent wartości uzyskanej dla komórek NB4 (P <0,001), co sugeruje, że komórki z t (15 ; 17) translokacja wspiera plazmę znacznie wydajniej niż komórki bez translokacji. Ponadto, w obecności kwasu aminokapronowego, analog lizyny, który hamuje wiązanie plazminogenu do aneksyny II, wytwarzanie plazmin przez komórki NB4 zostało zredukowane do 29,2% (P <0,001) wskaźnika w nieobecności, podczas gdy tworzenie plazminy w fazie rozpuszczalnej nie miało to wpływu. Co więcej, monoklonalne przeciwciało anty-aneksyny II powodowało zmniejszenie generacji plazmin przez komórki NB4 do 65% (P <0,02) obserwowanego, gdy komórki NB4 były inkubowane z równoważnym stężeniem przeciwciała przeciwko aneksynie I IgG. Wyniki te stanowią dowód na to, że aneksyna II na powierzchni białkowych promielocytów odgrywa kluczową rolę w wytwarzaniu plazmin.
W celu dalszej analizy roli aneksyny II w aktywacji plazminogenu przez t-PA, komórki ujemne t (15; 17) (APL-1), które nie zawierają aneksyny powierzchni komórkowej II, transfekowano plazmidem zawierającym albo pełnej długości cDNA aneksyny II lub pusty wektor.34 Transfektanty APL-1 stymulowały produkcję plazmininy 2,7 razy skuteczniej niż komórki nietransfekowane (P <0,001) i prawie dwa razy skuteczniej niż komórki transfekowane pustym wektorem (P <0,01). Dane te sugerują, że ekspresja aneksyny II jest bezpośrednio skorelowana ze zdolnością do generowania plazminy.
Rysunek 2
[hasła pokrewne: narośl na skórze, atropina, alprazolam ]
[więcej w: napięciowy ból głowy, narośl na skórze, nefropatia cukrzycowa ]
